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鼠尾膠原蛋白I型 澄清牛瘤胃液 PD1/PDL1 重組人 PD-1 頭孢吡普 重組人胰島素
產品別名:Collagen, Type I (5mg/ml), from rat tail 產品型號:C20-200110 產品包裝:10mg/2ml 產品品牌:Perfemiker
產品描述:溶解于 0.006mol/L HAc,無菌溶液。
運輸和保存方法 冰袋運輸。4℃保存,有效期1年。不可凍存。
產品介紹:
膠原蛋白(Collagen)是結締組織和內臟器官外基質的主要成分,但在皮膚、肌腱、骨骼中分布*為廣泛。膠原蛋白在結構和遺傳學上被分為不同類型,I型膠原蛋白(Collagen, Type I)結構上是由2個α1鏈和1個α2鏈組成的異源多聚體,在37℃中性條件下可形成3股螺旋結構,被廣泛用于多種細胞的培養基質,如肝細胞、纖維細胞、脊髓神經節、雪旺氏細胞等。另外,I型膠原蛋白在細胞生長、分化、遷移和組織形態的發生等方面也具有重要應用。
上海創賽科技的鼠尾膠原蛋白I型 (rat tailtendon collagen type I) 是通過Birkedal-Hansen 的方法,通過醋酸抽提、氯化鈉沉淀、磷酸氫二鈉沉淀等步驟制備的。鼠尾膠原蛋白可用于包被細胞培養器皿 ,培養一些在普通細胞、培養器皿中不易貼壁的細胞。 也可用于制備三維膠 ,模擬真實的生長環境 ,使細胞在三維環境中生長 。
Perfemiker鼠尾膠原蛋白包被的 培養皿中生長的 PC-12 細胞
Perfemiker鼠尾膠原蛋白三維膠中 生長的 NIH-3T3 細胞(接種后 5天)
和Sigma鼠尾膠原蛋白(cat# C7661) SDS-PAGE 電泳對比。 A: Sigma B:Perfemiker
使用方法
1、細胞培養器皿的表面包被 推薦濃度: 1-5ug/cm2
以包被濃度為 2 ug/cm2 為例:
用無菌0.006mol/L(0.36g/L) 乙酸將膠原蛋白稀釋到0.012mg/ml。按表 (一)體積加到相應的培養器皿中:
確保膠原蛋白溶液鋪滿器皿的表面,開蓋在超凈臺上過夜晾干。 也可以在室溫放置 1小時后,用PBS洗3-4次后直接使用。
包被好的器皿在 4-25℃至少可保存3個月以上的時間。
2、三維膠原的制備
Perfemiker鼠尾膠原蛋白I型在濃度1mg/ml以上,pH 7左右時可形成具有一定強度三維膠,建議成膠濃度1-2mg/ml。生友膠原蛋白溶解于0.006mol/L 乙酸中,在成膠過程中需要加入0.06X 體積的 0.1mol/L NaOH 來中和。
需要的溶液 ( 均需要 無菌 、 預冷 ): 10xPBS( 可含10 mg/L的酚紅用于 pH 指示 )或 10x 培養液 , 0.1mol/L NaOH, 0.1mol/L 乙酸(一般不用), 雙蒸水
A.不含細胞的三維膠原的制備(以配制1毫升,1mg/ml三維膠為例):將200ul shengyou鼠尾膠原蛋白I型(5mg/ml)加到置于冰浴的離心管中,加入 690ul H2O。然后加到12ul 0.1mol/L NaOH中(如果反過來把12ul 0.1mol/L NaOH加到膠原溶液中,會由于NaOH不能迅速混勻而產生局部的膠原凝結),立即混勻。再加入100ul 10xPBS或10x培養液,混勻后立即加到培養器皿中(混勻后pH為7左右,如果PBS或培養液中沒有加酚紅,初次使用時需要用pH試紙測試)。將培養器皿在室溫(25度左右)下放置20分鐘待膠凝固后,轉移到培養箱內。如果配制中使用的是10xPBS,使用前需要加入適當體積的細胞培養液預平衡。
B.含細胞的三維膠原的制備(以配制1毫升,1mg/ml三維膠為例):準備好懸浮于培養液的細胞,并放置于冰浴中。將200ul Perfemiker鼠尾膠原蛋白I型 (5mg/ml)加到12ul 0.1mol/L NaOH中(如果反過來把12ul 0.1mol/L NaOH加到膠原溶液中,會由于NaOH不能迅速混勻而產生局部的膠原凝結),立即混勻。再加入23ul 10xPBS或10x培養液,混勻(混勻后pH為7左右,如果PBS或培養液中沒有加酚紅,初次使用時需要用pH試紙測試)。加入760ul的細胞懸浮液,混勻后立即加到培養器皿中。將培養器皿在室溫下放置20分鐘待膠凝固后,加入適當體積的細胞培養液,轉移到培養箱中培養。
使用注意事項:
鼠尾膠原蛋白I型在室溫下pH中性時可迅速成膠 ,在操作過程中要盡量保持低溫 。
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